Particules Lentivirales d'Activation (h) HoxB2: sc-404533-LAC

HOXB2 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB2, une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique de séquence, qui contribue à établir la polarité antéro-postérieure et l’identité segmentaire au cours du développement embryonnaire. HoxB2 régule des programmes d’expression génique contrôlant la spécification du destin cellulaire, la différenciation et la morphogenèse tissulaire via des réseaux transcriptionnels qui s’entrecroisent avec des voies de signalisation du développement, telles que les programmes répondant à l’acide rétinoïque. Une expression aberrante de HOXB2 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et dans des troubles du développement, où une transcription régulée par les HOX altérée peut influencer la prolifération, l’engagement de lignée et les phénotypes migratoires. En recherche biomédicale, HOXB2 est étudié à la fois comme moteur des circuits de régulation génique du développement et comme modulateur, dépendant du contexte, d’états transcriptionnels oncogéniques.

Les particules d'activation lentivirales HoxB2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HOXB2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HoxB2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HOXB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HoxB2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HOXB2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.