HoxA5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402499-NIC

HOXA5 codifica per il fattore di trascrizione homeobox HoxA5, un regolatore del legame al DNA specifico per sequenza che contribuisce a stabilire il patterning lungo l’asse antero‑posteriore e coordina programmi di differenziamento cellulare durante lo sviluppo. Nei tessuti adulti, HoxA5 influenza reti trascrizionali che controllano lo stato epitelio‑mesenchimale, l’organizzazione della matrice extracellulare e risposte al ciclo cellulare e all’apoptosi dipendenti dal contesto. Come parte del circuito regolatorio dei geni HOX, si integra con la cromatina e con vie che specificano la linea cellulare per plasmare l’identità tissutale e i processi di rimodellamento. Un’espressione di HOXA5 deregolata o il suo silenziamento epigenetico sono stati associati a stati di differenziamento alterati e a una riprogrammazione trascrizionale associata ai tumori in diversi contesti tissutali, supportandone l’utilizzo come nodo meccanicistico nella ricerca su modelli di malattia.

HoxA5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HOXA5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HOXA5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HOXA5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HOXA5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.