Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxA2: sc-403732-ACT

HOXA2 code le facteur de transcription homeobox humain HoxA2, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui établit l’identité antéro-postérieure durant l’embryogenèse et coordonne la spécification des lignages dans les tissus dérivés des crêtes neurales et associés au rhombencéphale. HoxA2 influence les programmes transcriptionnels du développement en modulant l’état de la chromatine et en s’intégrant aux réseaux régulateurs sensibles à l’acide rétinoïque et aux réseaux du cluster HOX qui contrôlent les décisions de destinée cellulaire et la morphogenèse tissulaire. Une expression dérégulée de HOXA2 a été associée à des anomalies craniofaciales et neurodéveloppementales congénitales, et l’altération de l’activité des programmes HOX est également étudiée dans le contexte de la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique. En tant que régulateur du développement aux effets dépendants du contexte, HOXA2 constitue un nœud utile pour disséquer les trajectoires de différenciation et l’architecture des circuits transcriptionnels.

HoxA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.