Plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxA11 (h): sc-405264

Présentation

HOXA11 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA11, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique aux séquences, qui contrôle les programmes de mise en place des patrons du développement et de différenciation du mésenchyme. Dans les cellules humaines, HoxA11 contribue à des réseaux transcriptionnels gouvernant la morphogenèse des membres et du tractus urogénital, et il est impliqué dans la décidualisation du stroma endométrial via un dialogue dépendant du contexte avec la signalisation des hormones stéroïdiennes et le remodelage de la chromatine. Une expression dérégulée de HOXA11 ou des modifications des paysages régulateurs ont été associées à des troubles de la reproduction et à des anomalies du développement, et les perturbations du cluster HOX constituent des caractéristiques récurrentes dans de nombreux types de cancers, où elles peuvent influencer la prolifération et l’identité de lignée. En tant que régulateur transcriptionnel nucléaire, HoxA11 représente un point d’entrée exploitable pour disséquer les circuits de régulation génique et les transitions d’états épigénétiques dans des modèles pertinents pour le développement et la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxA11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HOXA11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HOXA11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HOXA11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HoxA11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HOXA11 pour l'étude de la signalisation de HoxA11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HOXA11 essentiels à la fonction de HoxA11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HOXA11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HoxA11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HoxA11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HOXA11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HoxA11 plasmide HDR (h) et le HoxA11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HOXA11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HOXA11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.