Plásmido CRISPR de Activación (h2) HoxA11: sc-405264-ACT-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h2) HoxA11 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h2) HoxA11 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR HoxA11 (h2) y el plásmido de activación CRISPR HoxA11 (h22) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de HOXA11. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HoxA11 Anticuerpo (B-11): sc-393440
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h2) HoxA11 | sc-405264-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
El gen humano HOXA11 codifica el factor de transcripción homeobox HoxA11, un regulador que se une al ADN y ayuda a establecer el patrón anteroposterior y la identidad regional durante la embriogénesis, además de contribuir a programas de diferenciación en linajes mesenquimales y del tracto reproductor. HoxA11 modula la expresión génica mediante el reconocimiento de motivos homeobox y el control transcripcional dependiente de cofactores, interactuando con redes de señalización del desarrollo que gobiernan la morfogénesis, la remodelación tisular y las decisiones de destino celular. La expresión desregulada de HOXA11 o sus alteraciones epigenéticas se han asociado con malformaciones congénitas y con cánceres en los que programas HOX aberrantes favorecen estados alterados de diferenciación y proliferación. La edición genética dirigida a HOXA11 y los ensayos de genómica funcional se utilizan para cartografiar elementos cisreguladores, definir circuitos transcripcionales aguas abajo e investigar fenotipos relevantes para el desarrollo y la enfermedad en modelos celulares humanos.
HoxA11 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOXA11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
HoxA11 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOXA11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOXA11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxA11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOXA11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxA11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxA11 en células tumorales con expresión de HOXA11 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.