Plasmide CRISPR d'Activation (h2) HoxA11: sc-405264-ACT-2

Chez l’humain, le gène HOXA11 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA11, un régulateur se liant à l’ADN qui contribue à l’établissement du patron antéro-postérieur et de l’identité régionale au cours de l’embryogenèse, et participe aux programmes de différenciation dans les lignages mésenchymateux et du tractus reproducteur. HoxA11 module l’expression génique par la reconnaissance de motifs homéoboîte et par un contrôle transcriptionnel dépendant de cofacteurs, en s’intégrant à des réseaux de signalisation du développement qui gouvernent la morphogenèse, le remodelage tissulaire et les décisions de destinée cellulaire. Une expression dérégulée de HOXA11 ou des altérations épigénétiques ont été associées à des malformations congénitales et à des cancers, dans lesquels des programmes HOX aberrants soutiennent des états de différenciation et de prolifération modifiés. L’édition génomique ciblant HOXA11 et des tests de génomique fonctionnelle sont utilisés pour cartographier des éléments cis-régulateurs, définir des circuits transcriptionnels en aval et explorer des phénotypes pertinents pour le développement et la maladie dans des modèles cellulaires humains.

HoxA11 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXA11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxA11 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXA11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXA11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxA11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXA11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxA11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxA11 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXA11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.