HoxA10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401463-ACT

HOXA10 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxA10, einen sequenzspezifischen DNA-bindenden Regulator, der die embryonale Entwicklung räumlich steuert und die Gewebeidentität im Erwachsenenalter aufrechterhält. In menschlichen Zellen trägt HoxA10 zur anterior–posterioren Regionalisierung, zur Organogenese und zur Festlegung von Zelllinien bei, indem es Transkriptionsprogramme koordiniert, die mit Entwicklungs-Signalnetzwerken wie retinsäure-abhängigen Signalwegen und hormonregulierter Genexpression verknüpft sind. Seine Aktivität ist insbesondere für die Uterus-/Endometriumbiologie und die hämatopoetische Differenzierung relevant, wobei veränderte Expression Proliferations- und Differenzierungszustände verschieben kann. Eine fehlregulierte HOXA10-Expression wird mit Entwicklungsanomalien in Verbindung gebracht und wurde im Kontext reproduktiver Störungen sowie malignitätsassoziierter transkriptioneller Umprogrammierung bei hämatologischen Erkrankungen untersucht.

HoxA10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOXA10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxA10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOXA10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOXA10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxA10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOXA10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxA10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxA10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOXA10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.