Plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP UL1 (m): sc-433226

Présentation

Le gène murin *Hnrnpul1* code hnRNP UL1, une protéine nucléaire liant l’ARN qui s’associe à des complexes ribonucléoprotéiques afin de coordonner le traitement du pré‑ARNm, le transport de l’ARN et, plus largement, des programmes d’expression génique. hnRNP UL1 a également été impliquée dans les réponses aux dommages de l’ADN via des interactions avec des facteurs associés à la réparation, contribuant au maintien du génome en situation de stress réplicatif. Par ces fonctions, *Hnrnpul1* peut influencer des voies qui régissent la maturation de l’ARN, des processus liés à la chromatine et la progression du cycle cellulaire. La dérégulation de membres de la famille hnRNP est fréquemment étudiée dans des contextes d’instabilité génomique et de contrôle dysrégulé du transcriptome, pertinents pour la biologie du cancer et certains phénotypes du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP UL1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hnrnpul1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hnrnpul1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hnrnpul1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hnRNP UL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hnrnpul1 pour l'étude de la signalisation de hnRNP UL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hnrnpul1 essentiels à la fonction de hnRNP UL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hnrnpul1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hnRNP UL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le hnRNP UL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hnrnpul1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hnRNP UL1 plasmide HDR (m) et le hnRNP UL1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hnrnpul1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hnrnpul1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.