Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP U: sc-401375-ACT

HNRNPU code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène U (hnRNP U), un facteur multifonctionnel de liaison à l’ARN et à l’ADN qui s’associe à la chromatine et à la matrice nucléaire pour coordonner la régulation transcriptionnelle, la maturation du pré-ARNm et l’organisation du génome à grande échelle. hnRNP U contribue à l’épissage co‑transcriptionnel, à la stabilité des ARNm et aux interactions de chromatine à longue distance, reliant le métabolisme de l’ARN à l’architecture nucléaire et aux programmes d’expression génique dépendants du cycle cellulaire. Des altérations de la dose ou de la fonction de HNRNPU ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une dérégulation de l’expression génique, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des mécanismes de régulation du génome. Son interactome étendu relie également hnRNP U à des réseaux transcriptionnels sensibles au stress ainsi qu’à des voies contrôlant la différenciation neuronale et la régulation des gènes synaptiques.

hnRNP U Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNRNPU sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP U Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNRNPU dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNRNPU, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP U. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNRNPU natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP U au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP U dans les cellules tumorales présentant une expression de HNRNPU silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.