Particules Lentivirales d'Activation (h) hnRNP K: sc-417266-LAC

HNRNPK code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène K (hnRNP K), une protéine multifonctionnelle se liant à l’ADN et à l’ARN, qui coordonne le contrôle transcriptionnel, l’épissage des pré-ARNm, la stabilité des ARNm et la traduction. hnRNP K agit comme un échafaudage central reliant des voies dépendantes des signaux à la chromatine et à des complexes ribonucléoprotéiques, influençant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes d’expression génique d’adaptation au stress. Par ses interactions avec des facteurs tels que des réseaux régulés par p53 et des modules de signalisation de kinases, hnRNP K contribue à façonner des transcriptomes et des protéomes spécifiques du contexte. La dérégulation de l’expression de HNRNPK ou de l’activité de hnRNP K a été associée à des phénotypes de différenciation et de prolifération altérés et fait fréquemment l’objet d’études moléculaires en cancérologie et dans le domaine du neurodéveloppement.

Les particules d'activation lentivirales hnRNP K (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HNRNPK dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales hnRNP K (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HNRNPK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de hnRNP K. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HNRNPK ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.