Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP K: sc-417266-ACT

HNRNPK code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène K (hnRNP K), une protéine multifonctionnelle de liaison aux acides nucléiques qui coordonne la transcription, l’épissage du pré-ARNm, la stabilité de l’ARNm et la traduction via des interactions avec des éléments ARN/ADN poly(C) et divers partenaires de signalisation. hnRNP K intègre des signaux provenant de voies telles que MAPK/ERK et des réseaux de réponse aux dommages de l’ADN afin de moduler des programmes d’expression génique associés à la chromatine et un traitement de l’ARN adaptatif au stress. En agissant comme échafaudage pour des complexes ribonucléoprotéiques, elle influence la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et la différenciation. Une expression ou une fonction dérégulée de HNRNPK a été associée à une altération de la régulation de gènes oncogéniques et neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie de l’ARN et du contrôle transcriptionnel dépendant des signaux.

hnRNP K Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNRNPK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP K Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNRNPK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNRNPK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP K. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNRNPK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP K au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP K dans les cellules tumorales présentant une expression de HNRNPK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.