Plasmide Double Nickase (h) hnRNP F: sc-401892-NIC

HNRNPF code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène F (hnRNP F), une protéine liant l’ARN qui reconnaît des motifs riches en G afin de réguler l’épissage alternatif des pré-ARNm, le traitement de l’extrémité 3′ et la stabilité des ARNm. hnRNP F agit au sein des réseaux d’épissage et de traitement co‑transcriptionnel de l’ARN, influençant le choix des isoformes de transcrits et les programmes de régulation génique post‑transcriptionnelle. En modulant le métabolisme de l’ARN, HNRNPF affecte des voies liées au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses au stress et au remodelage des transcrits dépendant des signaux. Une activité dérégulée de hnRNP F et des profils d’épissage altérés ont été rapportés dans des contextes de maladies humaines, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des défauts de traitement de l’ARN et de la dérégulation de l’expression génique.

hnRNP F Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HNRNPF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HNRNPF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HNRNPF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HNRNPF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.