hnRNP E1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423930

Übersicht

Pcbp1 kodiert das murine heterogene nukleäre Ribonukleoprotein E1 (hnRNP E1), ein RNA-bindendes Protein, das C-reiche Elemente erkennt und so die Stabilität und Translation von mRNA steuert. hnRNP E1 ist an der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt, die mit Zellzyklusfortschritt, Stressantworten und Differenzierung verknüpft ist, indem es die Verfügbarkeit von Transkripten im Zytoplasma und deren Translation an den Ribosomen mitprägt. Über seine Funktionen in der RNA-Prozessierung und der Kontrolle der Translation beeinflusst hnRNP E1 Signalwege, die mit epithelial–mesenchymaler Transition, Zytoskelett-Remodeling und signalabhängigen Genexpressionsprogrammen assoziiert sind. Eine fehlregulierte PCBP1/hnRNP E1-Aktivität wurde in experimentellen Modellen mit einer veränderten RNA-Homöostase sowie mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Tumorbiologie und entzündliche Signalübertragung relevant sind.

Das hnRNP E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pcbp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pcbp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pcbp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die hnRNP E1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pcbp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der hnRNP E1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pcbp1-Exone abzielen, die für die hnRNP E1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pcbp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom hnRNP E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom hnRNP E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pcbp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das hnRNP E1 HDR-Plasmid (m) und hnRNP E1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pcbp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pcbp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.