Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP E1: sc-401557-ACT

PCBP1 code pour la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène E1 (hnRNP E1), un facteur de liaison à l’ARN et à l’ADN qui coordonne la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique en contrôlant la stabilité des ARNm, l’épissage alternatif, le transport et la traduction. hnRNP E1 reconnaît des éléments de séquence riches en cytosines au sein des transcrits cibles et participe à des complexes ribonucléoprotéiques qui couplent des signaux de signalisation à une synthèse protéique régulée. Par ces activités, PCBP1 contribue à des processus cellulaires tels que la différenciation, les réponses au stress et le maintien de l’homéostasie du protéome. Une expression ou une fonction altérée de PCBP1/hnRNP E1 a été associée à des programmes d’expression génique dérégulés observés en oncologie et dans d’autres troubles liés à un traitement aberrant de l’ARN.

hnRNP E1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP E1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP E1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP E1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP E1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.