hnRNP C1/C2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400993-NIC

HNRNPC kodiert das heterogene nukleäre Ribonukleoprotein C1/C2 (hnRNP C1/C2), ein reichlich vorhandenes nukleäres RNA-bindendes Protein, das sich an entstehender prä‑mRNA anlagert und die Wahl von Spleißstellen, die mRNA‑Reifung und die Stabilität von Transkripten reguliert. hnRNP C1/C2 trägt zur Sicherung der Genauigkeit der RNA‑Prozessierung bei, indem es mit U2AF2 an kryptischen Polyuridin‑Trakten konkurriert; dadurch wird eine fehlerhafte Exonisierung Alu‑abgeleiteter Sequenzen begrenzt und die Isoformzusammensetzung mitgeprägt. Über diese Aktivitäten beeinflusst es breitere Genexpressionsprogramme, die mit Zellzykluskontrolle, DNA‑Schadensantworten und Proteostase verknüpft sind, und wird häufig im Zusammenhang mit RNA‑Dysregulation untersucht, wie sie in Krebs- und Modellen neurodegenerativer Erkrankungen beobachtet wird. Eine veränderte Expression oder Funktion von HNRNPC wurde zudem mit Veränderungen in der angeborenen Immun-Signalgebung und in stressadaptiven transkriptionellen Netzwerken in Verbindung gebracht, die durch einen gestörten RNA‑Stoffwechsel angetrieben werden.

hnRNP C1/C2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HNRNPC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HNRNPC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HNRNPC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HNRNPC-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.