Plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP C1/C2 (m): sc-420894

Présentation

Hnrnpc code pour la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène C1/C2 (hnRNP C1/C2), des protéines nucléaires abondantes liant l’ARN qui s’assemblent sur les pré-ARNm afin d’empaqueter les transcrits naissants et d’en orienter le devenir. hnRNP C participe au choix co-transcriptionnel des sites d’épissage, à la maturation de l’extrémité 3′ des ARNm, ainsi qu’aux décisions de rétention/export nucléaire, et contribue au maintien de l’intégrité du transcriptome en s’opposant à l’exonisation inappropriée d’éléments Alu et à d’autres événements d’épissage cryptiques. Par ces fonctions, Hnrnpc s’intègre aux voies centrales du métabolisme de l’ARN et influence des programmes d’expression génique liés à la prolifération, à la différenciation et aux réponses cellulaires au stress. Dans la littérature, une dérégulation de hnRNP C a été associée à des paysages d’épissage altérés observés dans des modèles pertinents pour le cancer et la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud fréquemment étudié pour analyser les défauts de maturation de l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP C1/C2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hnrnpc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hnrnpc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hnrnpc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hnRNP C1/C2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hnrnpc pour l'étude de la signalisation de hnRNP C1/C2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hnrnpc essentiels à la fonction de hnRNP C1/C2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hnrnpc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hnRNP C1/C2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le hnRNP C1/C2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hnrnpc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hnRNP C1/C2 plasmide HDR (m) et le hnRNP C1/C2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hnrnpc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hnrnpc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.