Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP A2/B1: sc-400635-ACT

HNRNPA2B1 code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène A2/B1 (hnRNP A2/B1), une protéine liant l’ARN qui coordonne l’épissage du pré‑ARNm, la stabilisation de l’ARNm et le transport nucléocytoplasmique via la reconnaissance de motifs ARN spécifiques au sein de complexes ribonucléoprotéiques. Elle agit également comme adaptateur d’export des ARNm et contribue à la dynamique des granules d’ARN, ce qui la relie aux réponses au stress et à la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique. hnRNP A2/B1 participe à des voies contrôlant les programmes d’épissage alternatif, la maturation de l’ARN et le contrôle de la traduction, influençant ainsi les transitions d’état cellulaire et la diversité du protéome. La dérégulation de HNRNPA2B1 a été associée à des réseaux d’épissage altérés et à un métabolisme de l’ARN aberrant observés dans le cancer et les maladies neurodégénératives, ce qui soutient son utilisation dans l’étude des mécanismes de régulation de l’ARN et du remodelage transcriptomique lié aux maladies.

hnRNP A2/B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNRNPA2B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP A2/B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNRNPA2B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNRNPA2B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP A2/B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNRNPA2B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP A2/B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP A2/B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HNRNPA2B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.