hnRNP A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400704-NIC

HNRNPA1 は、ヘテロ核リボヌクレオプロテインA1（hnRNP A1）をコードしており、pre-mRNA に結合して選択的スプライシング、mRNA の核外輸送、翻訳を制御する多機能なRNA結合タンパク質です。hnRNP A1 はスプライソソームの組み立てやエクソン定義に関与するほか、テロメア反復配列を含むRNAやテロメアDNA結合因子との相互作用を通じて、テロメア維持にも寄与します。RNAのプロセシングとRNA代謝を協調的に制御することで、hnRNP A1 はストレスグラニュールの動態や、細胞増殖・分化に関連するより広範な遺伝子発現プログラムに影響を及ぼします。HNRNPA1 の制御異常は、神経変性やがんに関連するRNAプロセシングの変化に関与するとされており、RNAスプライシングネットワークやプロテオスタシス経路を解析するための有用な標的となります。

hnRNP A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HNRNPA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HNRNPA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HNRNPA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HNRNPA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。