Plasmide CRISPR d'Activation (m) hnRNP A1: sc-420895-ACT

Le gène murin Hnrnpa1 code hnRNP A1, une protéine de liaison à l’ARN abondante qui s’associe aux pré-ARNm afin de coordonner l’épissage alternatif, l’export des ARNm, leur stabilité et leur traduction. hnRNP A1 fait également la navette entre le noyau et le cytoplasme et contribue à la dynamique des granules de stress ainsi qu’au contrôle qualité des ARN, reliant le traitement des ARN aux réponses cellulaires au stress. Par une régulation étendue du transcriptome, hnRNP A1 influence des voies telles que la fonction du spliceosome, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes de signalisation liés à la croissance. Une dérégulation de l’expression ou de la localisation de hnRNP A1 a été associée à des profils d’épissage altérés et à un métabolisme des ARN perturbé, pertinents pour la neurodégénérescence et la biologie du cancer, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée pour des études mécanistiques de la régulation post-transcriptionnelle.

hnRNP A1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hnrnpa1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP A1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hnrnpa1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hnrnpa1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hnrnpa1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Hnrnpa1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.