Plasmide Double Nickase (h) HNF-6: sc-401082-NIC

ONECUT1 code pour le facteur nucléaire hépatocytaire 6 (HNF-6), un facteur de transcription à homéoboîte de type CUT qui coordonne des programmes géniques développementaux et métaboliques dans les tissus dérivés de l’endoderme, notamment le foie et le pancréas. HNF-6 régule la différenciation épithéliale, la morphogenèse des conduits et la spécification des lignages sécrétoires en modulant des réseaux transcriptionnels qui recoupent le développement hépatobiliaire, la différenciation endocrinienne pancréatique et, plus largement, les voies d’homéostasie métabolique. Une activité altérée de ONECUT1/HNF-6 a été associée à des perturbations des fonctions hépatiques et pancréatiques, impliquant ce régulateur dans des mécanismes pertinents pour la susceptibilité au diabète, des phénotypes cholestatiques et des dysgénésies hépatobiliaires dans des systèmes expérimentaux. En tant que régulateur transcriptionnel spécifique de séquence, HNF-6 est fréquemment étudié pour ses effets sur l’identité cellulaire, l’état de la chromatine et des programmes d’expression génique dépendants du contexte.

HNF-6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ONECUT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ONECUT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ONECUT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ONECUT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.