Plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (m): sc-420893

Présentation

Onecut1 code le facteur de transcription à homéoboîte HNF-6, un régulateur clé de la différenciation des tissus dérivés de l’endoderme chez la souris, notamment les lignées pancréatiques, hépatiques et biliaires. HNF-6 se lie à des éléments cis‑régulateurs afin de coordonner des programmes transcriptionnels qui contrôlent la morphogenèse épithéliale, le développement des canaux et les décisions de destin cellulaire, et il interagit fonctionnellement avec les voies de signalisation Notch, Wnt/β‑caténine et TGF‑β au cours de l’organogenèse et de l’homéostasie tissulaire. Une activité altérée de Onecut1 a été associée à des défauts du développement endocrinien pancréatique et de la mise en place des canaux, ce qui le rend pertinent pour l’étude des dysfonctionnements métaboliques et des phénotypes développementaux. Dans les systèmes expérimentaux, la perturbation de Onecut1/HNF-6 est utilisée pour disséquer les réseaux transcriptionnels qui couplent l’état de la chromatine à la spécification des lignages et à la maturation des organes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Onecut1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Onecut1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Onecut1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HNF-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Onecut1 pour l'étude de la signalisation de HNF-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Onecut1 essentiels à la fonction de HNF-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Onecut1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HNF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HNF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Onecut1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HNF-6 plasmide HDR (m) et le HNF-6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Onecut1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Onecut1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.