Plasmide Double Nickase (h) HNF-3α: sc-400743-NIC

FOXA1 (HNF-3α) est un facteur de transcription pionnier à hélice ailée (winged-helix) qui se fixe à la chromatine compactée afin d’établir l’accessibilité des régions régulatrices et de coordonner des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée dans les tissus épithéliaux humains. Il régule des réseaux contrôlant la différenciation, la signalisation des récepteurs hormonaux et l’homéostasie métabolique, notamment via des interactions croisées avec les voies des récepteurs aux androgènes et aux œstrogènes et la modulation de l’activité des enhancers. Par ses effets sur l’identité cellulaire et la production transcriptionnelle, une altération de la fonction de FOXA1 a été associée à des changements des états de prolifération et de différenciation observés dans de nombreux types de tumeurs et dans des troubles liés au système endocrinien. FOXA1 est donc largement utilisé comme modèle pour étudier le remodelage de la chromatine, la sélection des enhancers et la régulation transcriptionnelle dépendante du contexte.

HNF-3α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.