Plasmide CRISPR d'Activation (h) HNF-3α: sc-400743-ACT

FOXA1 (HNF-3α) est un facteur de transcription pionnier de la famille forkhead, capable de se lier à la chromatine compactée afin d’établir des paysages régulateurs accessibles et de coordonner des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. Dans les tissus épithéliaux humains, il intègre la signalisation des récepteurs hormonaux aux réseaux transcriptionnels qui contrôlent la différenciation, le métabolisme et la progression du cycle cellulaire, avec notamment d’importantes interactions croisées avec des voies de récepteurs nucléaires telles que la transcription dépendante des récepteurs aux œstrogènes et aux androgènes. L’activité de FOXA1 influence la sélection des enhancers et le remodelage de la chromatine, façonnant des processus développementaux et homéostatiques dans le foie, le poumon, le pancréas et l’épithélium mammaire. Une expression dérégulée de FOXA1 ou des profils de liaison à la chromatine modifiés sont fréquemment étudiés dans les cancers hormonodépendants et d’autres maladies caractérisées par une identité épithéliale perturbée et une reprogrammation transcriptionnelle.

HNF-3α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HNF-3α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HNF-3α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HNF-3α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HNF-3α dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.