Plasmide Double Nickase (m) HNF-1β: sc-423295-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) HNF-1β correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HNF-1β Double Nickase (m) et le plasmide HNF-1β Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Hnf1b. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) HNF-1β | sc-423295-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) HNF-1β | sc-423295-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Hnf1b** code le facteur nucléaire 1β des hépatocytes (**HNF‑1β**), un facteur de transcription contenant un homéodomaine qui régule la différenciation épithéliale et la morphogenèse des organes dans le rein, le pancréas, le foie et les voies biliaires. HNF‑1β se lie à des éléments promoteurs et amplificateurs (enhancers) afin de coordonner des programmes géniques gouvernant l’identité des segments du néphron, le transport tubulaire et la polarité épithéliale, en s’intégrant aux réseaux transcriptionnels du développement lors de la ramification et de la mise en place des structures canalaires. Une activité dérégulée de HNF‑1β est associée à des anomalies congénitales du rein et des voies urinaires, à la cystogenèse rénale et à des défauts du développement pancréatique, ce qui en fait un nœud clé pour étudier les relations génotype‑phénotype dans les tissus épithéliaux. Dans les modèles murins, la perturbation de **Hnf1b** est largement utilisée pour analyser le contrôle transcriptionnel de l’organogenèse, la spécification des lignages canalaires et la régulation de gènes métaboliques.
HNF-1β Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hnf1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hnf1b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hnf1b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hnf1b.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.