Plasmide Double Nickase (h) HNF-1β: sc-400537-NIC

HNF1B code le facteur nucléaire 1 bêta des hépatocytes (HNF‑1β), un facteur de transcription contenant un homéodomaine qui régule la différenciation épithéliale et l'organogenèse dans le rein, le pancréas, le foie et l'appareil urogénital. HNF‑1β se lie à des éléments promoteurs et amplificateurs (enhancers) afin de coordonner des réseaux de gènes impliqués dans le transport tubulaire, la polarité cellulaire et l'homéostasie métabolique, en intégrant des signaux qui façonnent l'identité épithéliale et la morphogenèse. La perturbation des programmes transcriptionnels dépendants de HNF1B est associée aux anomalies congénitales du rein et des voies urinaires, aux phénotypes rénaux kystiques et aux syndromes de diabète monogénique, ce qui en fait un nœud clé pour l'étude de la régulation transcriptionnelle du développement. Dans les systèmes modèles humains, la fonction de HNF‑1β est couramment évaluée au travers de modifications de la spécification de lignée, des propriétés de barrière épithéliale et de l'expression des gènes cibles en aval.

HNF-1β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HNF1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HNF1B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HNF1B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HNF1B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.