Plasmide CRISPR d'Activation (h) HNF-1β: sc-400537-ACT

HNF1B code le facteur de transcription HNF‑1β, un régulateur contenant un homéodomaine, essentiel à la différenciation épithéliale et au développement des organes, en particulier au sein des lignées rénale, pancréatique et hépatique. Il contrôle des réseaux de gènes impliqués dans le transport tubulaire, la polarité cellulaire et l’homéostasie métabolique, en interaction avec des voies qui façonnent la segmentation du néphron et l’identité de l’épithélium canalaire. Une expression ou une fonction altérée de HNF1B est associée à des anomalies du développement rénal, à des phénotypes kystiques et tubulo‑interstitiels, ainsi qu’à une dérégulation du métabolisme du glucose compatible avec des syndromes de diabète monogénique. En biologie des cancers, HNF‑1β est fréquemment étudié comme facteur de lignée et de différenciation dans les tumeurs épithéliales, où il peut influencer des programmes transcriptionnels liés à la prolifération et aux réponses au stress.

HNF-1β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNF1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HNF-1β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNF1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNF1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HNF-1β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNF1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HNF-1β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HNF-1β dans les cellules tumorales présentant une expression de HNF1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.