Plasmide CRISPR d'Activation (h) HNF-1α: sc-400594-ACT

HNF1A code le facteur nucléaire 1 alpha des hépatocytes (hepatocyte nuclear factor 1-alpha, HNF‑1α), un facteur de transcription contenant un homéodomaine qui pilote des programmes géniques épithéliaux et hépatopancréatiques. Il régule des réseaux contrôlant le métabolisme du glucose et des lipides, le transport des acides biliaires et des xénobiotiques, ainsi que la polarité épithéliale, en se liant à des éléments promoteurs/activateurs de cibles spécifiques des tissus. L’activité de HNF‑1α intègre des signaux métaboliques et développementaux afin de maintenir l’identité et la fonction des hépatocytes et des cellules bêta pancréatiques. La variation génétique ou une expression dérégulée de HNF1A est associée à des formes monogéniques et complexes de diabète, ainsi qu’à des phénotypes hépatiques et rénaux, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques des maladies métaboliques.

HNF-1α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNF1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HNF-1α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNF1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNF1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HNF-1α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNF1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HNF-1α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HNF-1α dans les cellules tumorales présentant une expression de HNF1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.