Plasmide CRISPR d'Activation (h) HN1: sc-412133-ACT

HN1 (hematological and neurological expressed 1) code une petite protéine conservée impliquée dans la régulation de la prolifération cellulaire, de la différenciation et de la progression du cycle cellulaire, dans divers contextes de développement et de stress. Bien que ses partenaires moléculaires restent imparfaitement caractérisés, l’expression de HN1 a été associée à des programmes transcriptionnels liés à la signalisation mitogène, à la plasticité épithélio-mésenchymateuse et à l’adaptation métabolique, suggérant un rôle dans la coordination des transitions d’état de croissance. Des niveaux d’HN1 dérégulés ont été rapportés dans de nombreux types de tumeurs et sont fréquemment évalués comme un corrélat de type biomarqueur de phénotypes cellulaires agressifs, notamment des signatures d’invasion modifiées et de réponse aux traitements. Ces propriétés font de HN1 une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation oncogéniques et de la régulation des états de lignée dans des modèles de cellules humaines.

HN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.