Hmx3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420887

Übersicht

Hmx3 (Homeobox-Protein Hmx3) ist ein Transkriptionsfaktor, der Entwicklungsprogramme der Genexpression durch sequenzspezifische DNA-Bindung und die Steuerung von Zellschicksalsentscheidungen reguliert. Bei der Maus ist die Aktivität von Hmx3 eng mit der Morphogenese des Innenohrs und der neuroentwicklungsbezogenen Musterbildung verknüpft und koordiniert nachgeschaltete transkriptionelle Netzwerke, die sensorische Strukturen und die neuronale Differenzierung formen. Eine Störung homeoboxvermittelter regulatorischer Schaltkreise unter Beteiligung von Hmx3 kann die embryonale Musterbildung und Organogenese verändern, weshalb Hmx3 für die Untersuchung angeborener Entwicklungsphänotypen und der genregulatorischen Logik der Ausbildung sensorischer Systeme relevant ist. Als nuklearer Regulator wird Hmx3 häufig im Kontext der Transkriptionskontrolle, der Festlegung von Zelllinien (Lineage Specification) und des Cross-talks entwicklungsrelevanter Signalwege untersucht.

Das Hmx3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hmx3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hmx3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hmx3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Hmx3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hmx3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Hmx3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hmx3-Exone abzielen, die für die Hmx3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hmx3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Hmx3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Hmx3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hmx3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Hmx3 HDR-Plasmid (m) und Hmx3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hmx3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hmx3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.