Plasmide Double Nickase (h) HMGCR: sc-400560-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HMGCR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HMGCR Double Nickase (h) et le plasmide HMGCR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HMGCR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HMGCR Antibody (C-1): sc-271595
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HMGCR | sc-400560-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HMGCR | sc-400560-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGCR code la 3‑hydroxy‑3‑méthylglutaryl‑CoA réductase, l’enzyme limitante de la voie du mévalonate qui convertit l’HMG‑CoA en mévalonate et contrôle la biosynthèse de novo du cholestérol. En modulant le flux de production des stérols et des isoprénoïdes, HMGCR influe sur la biogenèse membranaire, la prénylation des protéines et les sorties de signalisation associées à la croissance cellulaire et à l’adaptation métabolique. L’activité de HMGCR est étroitement régulée par la transcription dépendante de SREBP, des boucles de rétrocontrôle sensibles aux stérols et la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), intégrant la disponibilité en lipides à l’homéostasie cellulaire. Le dérèglement des enzymes de la voie du mévalonate, dont HMGCR, est fréquemment étudié dans le cadre de l’hypercholestérolémie, des mécanismes de risque d’athérosclérose et du reprogrammation métabolique dans le cancer et les états inflammatoires.
HMGCR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HMGCR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HMGCR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HMGCR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HMGCR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.