Plasmide CRISPR d'Activation (h) HMG-1/HMGB1: sc-400735-ACT

HMGB1 (HMG-1) est une protéine abondante, non histonique, associée à la chromatine, qui se lie à des structures d’ADN déformées et régule la dynamique des nucléosomes, les programmes transcriptionnels et la réparation de l’ADN. Dans le noyau, elle contribue à la stabilité du génome en participant à des processus liés aux réponses au stress de réplication, à la réparation par excision de base et à la réparation des cassures double brin, tout en modulant l’inflammation lorsqu’elle est libérée dans le milieu extracellulaire en tant que motif moléculaire associé aux dommages (DAMP). HMGB1 influence les voies de signalisation NF-κB et MAPK et peut interagir avec l’autophagie et les voies de mort cellulaire via des interactions avec des partenaires tels que RAGE et des récepteurs de la famille TLR. Une expression ou une localisation dérégulée de HMGB1 a été associée à la biologie tumorale, à des affections neuro-inflammatoires et à l’inflammation stérile, ce qui en fait une cible largement utilisée pour des études mécanistiques de la régulation de la chromatine et de la signalisation de stress.

HMG-1/HMGB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HMGB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HMG-1/HMGB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HMGB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HMGB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HMG-1/HMGB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HMGB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HMG-1/HMGB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HMG-1/HMGB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HMGB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.