Plasmide Double Nickase (m) HM74: sc-429832-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) HM74 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HM74 Double Nickase (m) et le plasmide HM74 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Hcar2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HM74 Antibody (D-8): sc-377292
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) HM74 | sc-429832-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Hcar2 code le récepteur couplé aux protéines G HM74 (également appelé GPR109A), un récepteur à haute affinité pour la niacine et des métabolites apparentés, qui couple principalement à la signalisation via Gi. L’activation de HM74 diminue l’AMPc intracellulaire et engage des voies en aval qui influencent le tonus inflammatoire, la chimiotaxie et le métabolisme des lipides, notamment par la modulation de programmes transcriptionnels liés à NF-κB. Le récepteur est exprimé dans des types cellulaires immunitaires et associés aux barrières, et a été utilisé pour étudier la détection des métabolites à l’interface entre l’alimentation, les signaux dérivés du microbiote et la régulation de l’immunité innée. Des altérations de la signalisation HM74/Hcar2 ont été impliquées dans des modèles de dyslipidémie, d’inflammation liée à l’athérosclérose, de pathologie de type colitique et de microenvironnements immunitaires associés aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en immunométabolisme.
HM74 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hcar2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hcar2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hcar2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hcar2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.