Plásmido Doble Nickase (m) HM74: sc-429832-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)HM74 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HM74 (m) y el plásmido de doble nickasa HM74 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Hcar2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HM74 Anticuerpo (D-8): sc-377292
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) HM74 | sc-429832-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Hcar2** codifica el receptor acoplado a proteína G **HM74** (también conocido como **GPR109A**), un receptor de alta afinidad para la niacina y metabolitos relacionados que se acopla principalmente a la señalización **Gi**. La activación de HM74 reduce el **AMPc** intracelular y activa vías downstream que influyen en el tono inflamatorio, la quimiotaxis y el manejo de lípidos, incluida la modulación de programas transcripcionales vinculados a **NF-κB**. El receptor se expresa en tipos celulares inmunitarios y asociados a barreras, y se ha utilizado para estudiar la detección de metabolitos en la interfaz entre la dieta, las señales derivadas de la microbiota y la regulación de la inmunidad innata. Las alteraciones de la señalización de HM74/Hcar2 se han implicado en modelos de dislipidemia, inflamación relacionada con la aterosclerosis, patología tipo colitis y microambientes inmunitarios asociados a tumores, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de inmunometabolismo.
HM74 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hcar2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hcar2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hcar2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hcar2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.