Plásmido CRISPR de Activación (m) HM74: sc-429832-ACT

El gen murino **Hcar2** codifica **HM74** (también conocido como **GPR109A**), un receptor acoplado a proteína G del tipo **Gi/o** que detecta metabolitos como el **ácido nicotínico** y el cuerpo cetónico **β‑hidroxibutirato**. La señalización de HM74 suprime la actividad de la **adenilato ciclasa** y modula programas posteriores dependientes de **AMPc**, influyendo en el metabolismo lipídico, el estado energético celular y la producción de mediadores inflamatorios. En contextos inmunitarios y epiteliales, la actividad de Hcar2 se entrecruza con la señalización de la inmunidad innata y la homeostasis de la barrera, modelando las respuestas de citocinas y el comportamiento de los leucocitos. Las vías Hcar2/HM74 desreguladas se estudian con frecuencia en modelos de estrés metabólico, inflamación del tejido adiposo e inmunometabolismo vinculado al microbioma.

HM74 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hcar2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HM74 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hcar2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hcar2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HM74. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hcar2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HM74 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HM74 en células tumorales con expresión de Hcar2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.