Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-G: sc-401226-ACT

HLA-G code une molécule non classique du CMH de classe I qui module la reconnaissance immunitaire en se liant à des récepteurs inhibiteurs tels que ILT2/LILRB1, ILT4/LILRB2 et KIR2DL4 présents sur les cellules NK, les lymphocytes T et des populations myéloïdes. Son expression favorise la tolérance immunitaire à l’interface materno-fœtale et contribue à la régulation de la présentation antigénique ainsi que de la fonction effectrice cytotoxique au sein du réseau plus large des points de contrôle CMH I/NK. HLA-G est fréquemment étudié dans des contextes d’échappement immunitaire et de microenvironnements immunosuppresseurs, notamment en cancérologie et dans des situations d’inflammation chronique. Des variations des niveaux d’HLA-G et de l’utilisation de ses isoformes ont été associées à la tolérance en transplantation, à l’auto-immunité et à la modulation immunitaire liée aux agents pathogènes, ce qui en fait une cible utile pour l’immunologie mécanistique.

HLA-G Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-G sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-G Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-G dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-G, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-G. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-G natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-G au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-G dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-G silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.