HLA-F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410821

Descripción general

HLA-F codifica una molécula no clásica del MHC de clase I que participa en la vigilancia inmunitaria al moldear las interacciones entre las células presentadoras de antígeno y los linfocitos mediante su unión a receptores inhibidores y activadores en células NK y en subpoblaciones de células T. A diferencia de las proteínas HLA-I clásicas, altamente polimórficas, HLA-F presenta una dinámica de expresión distintiva, que incluye retención intracelular y aumento de su expresión en la superficie celular en condiciones de estrés celular, infección o estados de activación, lo que favorece la modulación de los puntos de control inmunitarios y la tolerancia. HLA-F contribuye a procesos relacionados con la presentación de antígenos, la regulación de respuestas citotóxicas y mecanismos de evasión inmunitaria en tejidos inflamados y microambientes tumorales. Se ha informado de una expresión desregulada de HLA-F en múltiples contextos inmunomediados y oncológicos, lo que la hace relevante para desentrañar las vías que controlan la activación inmunitaria, las respuestas al interferón y el reconocimiento célula–célula.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HLA-F (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HLA-F en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HLA-F junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HLA-F tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HLA-F.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HLA-F para la investigación de la señalización de HLA-F, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HLA-F críticos para la función de HLA-F
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HLA-F para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HLA-F CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HLA-F CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HLA-F. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HLA-F (h) y el plásmido HDR HLA-F (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HLA-F para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HLA-F definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.