Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-F: sc-410821-ACT

HLA-F code une molécule non classique du CMH de classe I, exprimée à la surface cellulaire ainsi que dans des compartiments intracellulaires, et contribue à la modulation immunitaire et à des processus liés à la présentation des antigènes. Elle peut interagir avec des récepteurs inhibiteurs et activateurs des cellules NK et de certains sous-ensembles de lymphocytes T, modulant ainsi les réponses cytotoxiques, la tolérance immunitaire et la signalisation inflammatoire. HLA-F est régulée par le stress cellulaire et les états d’activation, ce qui la relie à des voies impliquées dans la surveillance immunitaire et les réponses aux infections. Des profils d’expression altérés de HLA-F ont été rapportés dans diverses maladies à médiation immunitaire et dans de nombreux cancers, ce qui motive des études mécanistiques sur l’échappement immunitaire et la régulation du microenvironnement.

HLA-F Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-F sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-F Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-F dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-F, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-F. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-F natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-F au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-F dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-F silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.