Particules Lentivirales d'Activation (m) HLA-E: sc-437133-LAC

Chez la souris, H2-T-ps code la molécule non classique du CMH de classe I HLA-E, une protéine conservée de présentation de l’antigène qui expose principalement des peptides dérivés des séquences leaders afin de réguler l’immunité innée et adaptative. HLA-E interagit avec des récepteurs inhibiteurs et activateurs sur les cellules NK et certains sous-ensembles de lymphocytes T, modulant la surveillance immunitaire, l’acquisition des capacités cytotoxiques (« licensing ») et la tolérance au sein des tissus. Son expression et son répertoire peptidique intègrent les signaux issus des voies de traitement des antigènes et d’assemblage du CMH de classe I, ce qui influence les interactions au niveau de la synapse immunologique. Le dérèglement de la signalisation médiée par HLA-E a été étudié dans des contextes d’échappement immunitaire viral, d’édition immunitaire tumorale, de biologie de la transplantation et de modèles de maladies inflammatoires.

Les particules d'activation lentivirales HLA-E (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de H2-T-ps dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HLA-E (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription H2-T-ps, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HLA-E. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif H2-T-ps ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.