Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-DRβ1: sc-406727-ACT

HLA-DRB1 code la chaîne β du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) de classe II HLA-DR, formant un récepteur hétérodimérique qui présente aux lymphocytes T CD4+ des peptides dérivés de l’extérieur de la cellule. En régulant le traitement et la présentation des antigènes, HLA-DRβ1 contribue à façonner l’amorçage des lymphocytes T, la tolérance périphérique et la dynamique des réseaux immunitaires pilotés par les cytokines dans les cellules présentatrices d’antigène professionnelles. Les variations de HLA-DRB1 influencent la spécificité de liaison des peptides et modifient la reconnaissance immunitaire, reliant ce locus à la susceptibilité et à la sévérité de nombreuses maladies immunitaires et inflammatoires. En tant que nœud central de l’immunité adaptative, HLA-DRβ1 est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la présentation d’auto-antigènes, la réponse aux agents pathogènes et la stratification immunogénétique.

HLA-DRβ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-DRB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-DRβ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-DRB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-DRB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-DRβ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-DRB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-DRβ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-DRβ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-DRB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.