Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HLA-DMβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406436
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HLA-DMβ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HLA-DMβ, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HLA-DMβ Anticuerpo (E-8): sc-393548
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HLA-DMβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406436 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
HLA-DMB codifica la cadena beta de HLA-DM, una molécula no clásica del MHC de clase II que cataliza la carga de péptidos en HLA-DR, -DP y -DQ al promover la liberación de CLIP y estabilizar complejos péptido–MHC II de alta afinidad en compartimentos endosómicos tardíos. Este paso de edición es central en las vías de procesamiento y presentación de antígenos que determinan el cebado de linfocitos T CD4+, la selección tímica y la tolerancia inmunitaria periférica. La alteración de la función de HLA-DM puede modificar el inmunopeptidoma e influir en programas de señalización inflamatoria vinculados a la autoinmunidad y a la desregulación inmunitaria. Por ello, HLA-DMB se estudia ampliamente en el contexto de redes de expresión de HLA de clase II, la presentación de antígenos sensible al interferón y los haplotipos de HLA asociados a enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HLA-DMβ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HLA-DMB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HLA-DMB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HLA-DMB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HLA-DMβ.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HLA-DMB para la investigación de la señalización de HLA-DMβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HLA-DMB críticos para la función de HLA-DMβ
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HLA-DMB para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HLA-DMβ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HLA-DMβ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HLA-DMB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HLA-DMβ (h) y el plásmido HDR HLA-DMβ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HLA-DMB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HLA-DMB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.