Plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DMβ (h): sc-406436

Présentation

HLA-DMB code la chaîne bêta de HLA-DM, une molécule non classique du CMH de classe II qui catalyse le chargement des peptides sur HLA-DR, -DP et -DQ en favorisant la libération de CLIP et en stabilisant des complexes peptide–CMH II de haute affinité dans les compartiments endosomaux tardifs. Cette étape d’édition est centrale dans les voies de traitement et de présentation de l’antigène qui façonnent l’amorçage des lymphocytes T CD4+, la sélection thymique et la tolérance immunitaire périphérique. Une fonction altérée de HLA-DM peut modifier l’immunopeptidome et influencer des programmes de signalisation inflammatoire liés à l’auto-immunité et à la dysrégulation immunitaire. Par conséquent, HLA-DMB est largement étudié dans le contexte des réseaux d’expression du CMH de classe II, de la présentation antigénique induite par l’interféron et des haplotypes HLA associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DMβ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HLA-DMB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HLA-DMB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HLA-DMB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HLA-DMβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HLA-DMB pour l'étude de la signalisation de HLA-DMβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HLA-DMB essentiels à la fonction de HLA-DMβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HLA-DMB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HLA-DMβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HLA-DMβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HLA-DMB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HLA-DMβ plasmide HDR (h) et le HLA-DMβ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HLA-DMB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HLA-DMB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.