Plasmide Double Nickase (h) HLA-C: sc-401517-NIC

HLA-C code une chaîne lourde classique du CMH de classe I qui s’associe à la β2‑microglobuline pour présenter à la surface cellulaire des peptides d’origine endogène, permettant la surveillance par les lymphocytes T CD8+. Outre la présentation d’antigènes, HLA-C constitue un ligand majeur des récepteurs de type immunoglobuline des cellules tueuses (KIR), inhibiteurs comme activateurs, modulant l’éducation des cellules NK (natural killer) et leurs seuils de cytotoxicité. Par ces processus de reconnaissance immunitaire, HLA-C s’intègre aux voies de traitement et de présentation des antigènes induites par l’interféron, notamment la génération de peptides par le protéasome et leur chargement dépendant de TAP dans le réticulum endoplasmique. La variation génétique et les modifications d’expression de HLA-C sont associées à la susceptibilité aux maladies inflammatoires et à médiation immunitaire et influencent les interactions hôte–pathogène, ce qui en fait un locus clé pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire.

HLA-C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HLA-C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HLA-C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HLA-C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HLA-C.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.