Partículas Lentivirales de Activación (h) HLA-A: sc-400294-LAC

HLA-A codifica una cadena pesada clásica del MHC de clase I que se asocia con la β2-microglobulina para presentar a las células T CD8+ péptidos derivados del interior de la célula, modulando la vigilancia inmunitaria específica de antígeno. A través de las vías de procesamiento y presentación de antígenos —que incluyen la generación de péptidos por el proteasoma, el transporte dependiente de TAP y la carga de péptidos en el retículo endoplásmico—, HLA-A ayuda a definir la composición del inmunopeptidoma en la superficie celular. La variación en HLA-A influye en el alorreconocimiento y la inmunogenicidad, y se estudia ampliamente en contextos como la infección, la evasión inmunitaria tumoral y la susceptibilidad a enfermedades autoinmunes. Como determinante central del reconocimiento inmunitario, los niveles de expresión de HLA-A y la unión de péptidos específica de alelo se analizan con frecuencia en modelos de investigación en inmunología, oncología y trasplantes.

Las partículas de activación lentiviral HLA-A (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HLA-A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HLA-A (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HLA-A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HLA-A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HLA-A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.