HKDC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432046

Übersicht

Hkdc1 kodiert HKDC1, ein Protein mit Hexokinase-Domäne, das an der Glukosephosphorylierung und der Regulation der zellulären Glukoseverwertung beteiligt ist. HKDC1 ist mit dem zentralen Kohlenstoffstoffwechsel verknüpft, trägt zum glykolytischen Flux bei und koordiniert die Energiehomöostase mit der mitochondrialen Funktion und der Nährstoffsensorik. In Mausmodellen wurde eine veränderte Hkdc1-Aktivität mit metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die die Glukoseverarbeitung und insulinresponsive Signalwege betreffen, was es für Studien zu metabolischer Fehlregulation und Stressantworten in der Leber und anderen energieintensiven Geweben relevant macht. Seine Expression und funktionelle Kopplung an den Kohlenhydratstoffwechsel stützen Untersuchungen dazu, wie hexokinaseähnliche Enzyme die zelluläre Anpassung an die Nährstoffverfügbarkeit prägen.

Das HKDC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hkdc1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hkdc1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hkdc1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HKDC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hkdc1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HKDC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hkdc1-Exone abzielen, die für die HKDC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hkdc1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HKDC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HKDC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hkdc1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HKDC1 HDR-Plasmid (m) und HKDC1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hkdc1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hkdc1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.