Plasmide CRISPR d'Activation (h) HJURP: sc-405278-ACT

HJURP (Holliday junction recognition protein) est une chaperonne d’histones centromérique essentielle à la ségrégation correcte des chromosomes. Elle assure le dépôt et le maintien, aux centromères, de la variante d’histone H3 CENP-A, coordonnant l’assemblage du kinétochore et la progression mitotique dans le cadre des processus centraux de maintenance de la chromatine couplés au centromère/kinétochore et à la réplication de l’ADN. Par son rôle dans la préservation de l’identité centromérique et de la stabilité du génome, les altérations d’expression ou de fonction de HJURP sont fréquemment étudiées dans le contexte du stress réplicatif, de l’aneuploïdie et de programmes transcriptionnels associés à la prolifération. Ces caractéristiques font de HJURP une cible utile pour étudier la fidélité mitotique, la dynamique de la chromatine et des phénotypes du cycle cellulaire pertinents pour le cancer dans des modèles cellulaires humains.

HJURP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HJURP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HJURP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HJURP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HJURP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HJURP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HJURP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HJURP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HJURP dans les cellules tumorales présentant une expression de HJURP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.