HIVEP3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410084-ACT

HIVEP3 (Mensch) kodiert einen großen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, auch bekannt als Schnurri-3, der an κB-ähnliche DNA-Elemente bindet und stimulusabhängige Transkriptionsprogramme moduliert. Er wurde mit der Regulation der NF-κB-assoziierten Genexpression sowie einer umfassenderen Kontrolle immunologischer und entzündlicher Signaloutputs in Verbindung gebracht, indem er Eingänge aus rezeptorvermittelten Signalwegen integriert und so nachgeschaltete Transkriptionsantworten formt. Die Aktivität von HIVEP3 beeinflusst die zelluläre Differenzierung und Homöostase durch kontextspezifische Transkriptionskontrolle; hierfür wurde eine Relevanz im Zusammenhang mit Immundysregulation und komplexen, krankheitsassoziierten Expressionssignaturen beschrieben. Diese Eigenschaften machen HIVEP3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Transkriptionsnetzwerken, die Signalübertragung mit Genregulation koppeln.

HIVEP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HIVEP3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HIVEP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HIVEP3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HIVEP3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HIVEP3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HIVEP3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HIVEP3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HIVEP3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HIVEP3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.