HIV Tat-SF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404479

Descripción general

HTATSF1 codifica el factor 1 específico de Tat de HIV (HIV Tat-SF1), una proteína nuclear de unión a ARN que actúa como cofactor transcripcional y regulador del procesamiento del pre-ARNm. Se ha relacionado HIV Tat-SF1 con la coordinación de la transcripción mediada por la ARN polimerasa II con la actividad del espliceosoma, influyendo en el empalme alternativo y la maduración del ARNm en diversos programas génicos. A través de estas funciones en el procesamiento co-transcripcional del ARN, HTATSF1 contribuye a la homeostasis celular y se ha estudiado en el contexto de las interacciones huésped–virus que dependen de un control preciso de la transcripción y del metabolismo del ARN. La desregulación de los factores de empalme acoplados a la transcripción es ampliamente relevante para cambios asociados a enfermedades en redes de expresión génica y en fenotipos de procesamiento de ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HIV Tat-SF1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HTATSF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HTATSF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HTATSF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HIV Tat-SF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HTATSF1 para la investigación de la señalización de HIV Tat-SF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HTATSF1 críticos para la función de HIV Tat-SF1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HTATSF1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HIV Tat-SF1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HIV Tat-SF1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HTATSF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HIV Tat-SF1 (h) y el plásmido HDR HIV Tat-SF1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HTATSF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HTATSF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.