Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone H1X: sc-411232-ACT

H1FX code l’histone H1X, une variante d’histone de liaison (« linker histone ») qui se fixe à l’ADN nucléosomal et contribue à la compaction de la chromatine de haut niveau ainsi qu’à l’organisation du génome. En modulant l’espacement des nucléosomes et l’accessibilité de la chromatine, l’histone H1X influence la régulation transcriptionnelle, le timing de réplication de l’ADN et les réponses aux dommages de l’ADN via des voies de remodelage de la chromatine. Une expression altérée de H1FX ou un déséquilibre entre les variantes d’histone H1 a été associé à une dérégulation épigénétique susceptible d’affecter les transitions d’état cellulaire, les programmes de prolifération et la stabilité du génome. Ces caractéristiques font de H1FX une cible utile pour étudier l’architecture de la chromatine, les réseaux transcriptionnels et des mécanismes épigénétiques pertinents pour les maladies dans les cellules humaines.

Histone H1X Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de H1FX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone H1X Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus H1FX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription H1FX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone H1X. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus H1FX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone H1X au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone H1X dans les cellules tumorales présentant une expression de H1FX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.