Plásmido Doble Nickase (h) Histone Deacetylase 6 (HDAC6): sc-400314-NIC

HDAC6 codifica la histona desacetilasa 6, una desacetilasa de lisina predominantemente citoplasmática que regula la proteostasis y la dinámica del citoesqueleto al desacetilar sustratos no histónicos como la α-tubulina, HSP90 y la cortactina. A través de estas actividades, HDAC6 influye en el transporte dependiente de microtúbulos, la formación de aggresomas, las vías de autofagia-lisosoma, las respuestas al estrés y la motilidad celular. HDAC6 también se integra con el control de calidad dependiente de ubiquitina mediante su dominio de unión a ubiquitina, vinculando la agregación de proteínas con los mecanismos de eliminación. La desregulación de la señalización de HDAC6 se ha asociado con la neurodegeneración, la invasión de células cancerosas y fenotipos inflamatorios, lo que la convierte en un nodo ampliamente estudiado en las vías reguladas por la acetilación.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HDAC6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HDAC6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HDAC6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HDAC6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.