Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone Deacetylase 6 (HDAC6): sc-400314-ACT

HDAC6 code l’histone désacétylase 6, une désacétylase majoritairement cytoplasmique qui régule l’acétylation de substrats non histoniques, notamment l’α-tubuline, la cortactine et HSP90, influençant ainsi la dynamique des microtubules, la motilité cellulaire et la protéostase dépendante des chaperonnes. En contrôlant la formation d’agrésomes dépendante de l’ubiquitine et leur élimination par autophagie, HDAC6 intègre le remodelage du cytosquelette aux réponses au stress induit par les protéines mal repliées. HDAC6 module également la signalisation dans des voies liées à l’immunité innée et à des programmes transcriptionnels inflammatoires, notamment via des effets sur des sorties régulées par NF-κB. Une activité ou une expression dérégulée de HDAC6 a été associée à des phénotypes de cellules cancéreuses, au stress protéotoxique lié à la neurodégénérescence et à des mécanismes de maladies à médiation immunitaire, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDAC6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDAC6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDAC6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 6 (HDAC6). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDAC6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 6 (HDAC6) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 6 (HDAC6) dans les cellules tumorales présentant une expression de HDAC6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.