Plasmide Double Nickase (m) Histone Deacetylase 4 (HDAC4): sc-431586-NIC

Le gène murin **Hdac4** code l’histone désacétylase 4 (HDAC4), une HDAC de classe IIa qui navette entre le noyau et le cytoplasme afin de coupler la phosphorylation dépendante des signaux à la régulation de la chromatine. HDAC4 agit principalement comme corépresseur transcriptionnel en s’associant à des facteurs tels que MEF2 pour moduler des programmes géniques dépendants de l’acétylation contrôlant la myogenèse, la transcription neuronale régulée par l’activité et le développement squelettique. Sa localisation et son activité intègrent la signalisation des kinases dépendantes de Ca2+/calmoduline et des protéines 14-3-3, reliant des signaux extracellulaires au contrôle épigénétique de la différenciation et des réponses au stress. Des dérégulations de réseaux transcriptionnels dépendants d’HDAC4 ont été impliquées, dans des modèles murins, dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, le remodelage cardiaque et des pathologies musculaires, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de la chromatine et de la signalisation.

Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hdac4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hdac4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hdac4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hdac4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.