Plasmide Double Nickase (h) Histone Deacetylase 4 (HDAC4): sc-400388-NIC

Le gène humain **HDAC4** code l’histone désacétylase 4, une HDAC de classe IIa qui fait la navette entre le noyau et le cytoplasme afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. HDAC4 agit au sein de complexes multiprotéiques de corépresseurs et intègre les voies de signalisation dépendantes des kinases calcium/calmoduline ainsi que des protéines 14-3-3 pour réguler l’expression génique contrôlée par MEF2, la différenciation cellulaire et la transcription en réponse au stress. Par un contrôle dépendant de la désacétylation de substrats histoniques et non histoniques, HDAC4 contribue à des voies impliquées dans le développement musculaire et neuronal, la plasticité synaptique et l’homéostasie métabolique. Une activité et une localisation dérégulées de HDAC4 ont été associées à des états épigénétiques anormaux observés dans des contextes neurodéveloppementaux, neurodégénératifs et oncogéniques, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la répression transcriptionnelle.

Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HDAC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HDAC4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HDAC4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HDAC4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.