Plasmide Double Nickase (h) Histone Deacetylase 10 (HDAC10): sc-403221-NIC

HDAC10 code l’histone désacétylase 10, une histone désacétylase dépendante du zinc qui module l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels en retirant des groupes acétyle des histones et d’autres substrats protéiques. En tant que désacétylase de classe II avec des fonctions cytoplasmiques marquées, HDAC10 a été impliquée dans la régulation de l’autophagie, des réponses aux dommages de l’ADN et de l’adaptation au stress cellulaire, influençant des voies qui contrôlent la prolifération et la survie. Des altérations de l’expression ou de l’activité de HDAC10 ont été associées à des modifications de l’état épigénétique ainsi qu’à des réseaux de signalisation liés au métabolisme et à l’immunité observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment en oncologie et dans des processus neuro-inflammatoires. Ces fonctions font de HDAC10 une cible utile pour disséquer le contrôle épigénétique de l’expression génique et ses phénotypes en aval dans des modèles cellulaires humains.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HDAC10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HDAC10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HDAC10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HDAC10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.